CRISPR/Cas12b系统实验

• 简要描述： 利用嗜热菌Cas12b（C2c1）实现高温条件下高效基因编辑。

• 基本原理：

  • crRNA引导Cas12b在37-55℃切割DNA，产生粘性末端（5' overhang）。

• 操作步骤 (细胞编辑版)：

  1. 设计： crRNA靶向目标区域（含PAM：TTN）。

  2. 复合体组装： Cas12b蛋白 + crRNA（37℃ 10 min）。

  3. 电转： 复合体导入细胞（程序：1400V, 20ms）。

  4. 筛选： 单克隆扩增 → Sanger测序验证编辑。

• 应用范围：

  • 高温环境编辑（如热休克研究）。

  • 多重基因编辑（Cas12b剪切后易重组）。

• 注意事项：

  • 严格控温（Cas12b最适43℃）。

  • 与Cas9 PAM序列不同（TTN vs NGG）。