简要描述: 在目标基因关键外显子两侧插入loxP位点,直接与Cre交配实现全身性敲除。
基本原理:
Cre介导重组切除关键外显子→移码突变→基因失活。
操作步骤 (应用流程):
KO first小鼠 × 全身型Cre鼠(如EIIa-Cre)。
子代PCR筛选:同时携带KO等位基因+Cre。
Western blot验证蛋白缺失。
应用范围:
快速构建全身性基因敲除模型。
胚胎致死基因的表型挽救研究。
注意事项:
需验证无截短蛋白残留。
同窝Cre阴性鼠作对照。